Tossicità del fumo di sigaretta

In un altro esperimento abbiamo raccolto il particolato e le sostanze idrosolubili dal fumo di sigaretta, ma come possiamo dimostrarne la tossicità? In questa esperienza, dimostreremo la tossicità di queste sostanze nei confronti di un microrganismo, cioè il lievito di birra.

Durata:

1 ora preparazione del terreno, 1 ora sterilizzazione, 1/2 ora semina, 3 giorni incubazione, 10' osservazione

Scopo:

Dimostrare la tossicità delle sostanze contenute nel fumo di sigaretta.

Preparazione del terreno

Materiale:

• Estratto di lievito 10 g/L
• Peptone 20 g/L
• Glucosio 20 g/L
• Agar 15 g/L
• Acqua distillata
• Piastre Petri (3)

Strumenti:

• Cilindro graduato
• Vetrini da orologio
• Flacone con tappo a vite
• Bacchetta di vetro
• Bilancia tecnica
• Piastra riscaldante
• Autoclave
• Cappa a flusso laminare
• Becco Bunsen

Procedimento:

1. Calcolare la quantità di terreno e dei rispettivi componenti (15 mL per piastra, serviranno tre piastre)
2. Pesare le quantità calcolate di estratto di lievito, peptone, glucosio e agar nei vetrini da orologio
3. Misurare la quantità calcolata di acqua distillata nel cilindro
4. Versare le polveri nel flacone, lavando i vetrini con l'acqua del cilindro in modo che finisca nel flacone
5. Versare tutta l'acqua del cilindro nel flacone
6. Scaldare il flacone su piastra riscaldante, mescolando, finché il terreno non diventa limpido (deve quasi bollire)
7. Chiudere il flacone con il tappo, senza stringerlo (lasciandolo leggermente aperto)
8. Sterilizzare in autoclave a 121°C per 15'
9. Lasciar raffreddare il flacone fino a 45° C circa (l'ideale è usare un bagno termostatico)
10. Da questo punto lavorare sotto cappa a flusso laminare
11. Aprire il flacone e flambarne l'imboccatura con il becco Bunsen
12. Aprire parzialmente il coperchio di una piastra Petri, e versarvi il terreno fino a coprirne circa 3/4.
13. Chiudere il coperchio, e muovere la piastra ad otto sul piano di lavoro in modo da distribuire il terreno su tutta la piastra.
14. Lasciare raffreddare la piastra col coperchio semiaperto sotto cappa
15. Ripetere per le altre piastre
16. Una volta che le piastre sono raffreddate e non c'è più condensa sui coperchi, richiudere le piastre.

Semina e incubazione

Materiale:

• Tre piastre con terreno sterile
• Batuffolo di cotone e beuta con soluzione di fumo di sigaretta dalla precedente esperienza
• Lievito di birra

Strumenti:

• Ansa
• Pinzette
• Becco Bunsen
• Cappa a flusso laminare
• Incubatrice

Procedimento (lavorare sotto cappa a flusso laminare):

1. Sistemare le piastre capovolte sotto la cappa a flusso laminare
2. Sterilizzare l'ansa nella fiamma del Bunsen, e lasciarla raffreddare per almeno 15'' sotto cappa, tenendola in mano.
3. Prelevare una piccola quantità di lievito con l'ansa
4. Sollevare con l'altra mano il fondo di una piastra
5. Strisciare l'ansa su tutta la superficie della piastra
6. Richiudere la piastra
7. Ripetere questa semina in un'altra piastra (la terza, non seminata, sarà il controllo terreno)
8. Con le pinzette, prendere il batuffolo di cotone sporco di fumo di sigaretta, e imbibirlo con la soluzione in cui è stato fatto gorgogliare il fumo
9. Sollevare il fondo di una piastra seminata con il lievito, e depositare al centro della piastra il batuffolo di cotone, in modo che si incolli al terreno (il batuffolo deve essere piccolo, altrimenti va spezzettato).
10. Richiudere la piastra.
11. Incubare le piastre a 25° C per tre giorni.
12. Osservare le piastre.

Risultato:

Nella piastra dove sono stati seminati i lieviti ma non c'è il batuffolo di cotone, i lieviti saranno cresciuti su tutta la piastra; dove c'è il batuffolo di cotone, invece, i lieviti saranno cresciuti solo ad una certa distanza da esso.

Nella piastra non seminata non dovrebbe essere cresciuto nulla, in caso contrario non è stato preparato bene il terreno.

Commenti:

Per ottenere una semina migliore, anziché partire direttamente da un cubetto di lievito di birra, è possibile sospendere il lievito in una provetta con soluzione fisiologica sterile, e seminare con l'ansa questa sospensione.